伊維菌素的危害及檢測(cè)目的

阿維菌素類藥物（Avermectins，AVMs）由鏈霉菌的發(fā)酵產(chǎn)物中分離的大環(huán)內(nèi)酯類抗生素，包括伊維菌素、多拉菌素、阿維菌素、愛普菌素等品種。阿維菌素類藥物是目前獸醫(yī)臨床上應(yīng)用*泛的獸用驅(qū)蟲藥，被廣泛應(yīng)用于牛、羊等動(dòng)物，其作用機(jī)理是干擾害蟲神經(jīng)生理活動(dòng)，致使害蟲出現(xiàn)麻痹而中毒死亡。阿維菌素類藥物雖然作用劑量小，但其脂溶性較高，殘留時(shí)間長(zhǎng)，世界衛(wèi)生組織將其列為高毒化合物。該類藥物的不規(guī)范使用和食物鏈富集，易引發(fā)運(yùn)動(dòng)失調(diào)、呼吸緩慢、中樞神經(jīng)系統(tǒng)中毒等癥狀，甚至致人死亡，對(duì)人類健康造成嚴(yán)重威脅，所以應(yīng)對(duì)動(dòng)物性食品中阿維菌素類藥物含量進(jìn)行監(jiān)測(cè)。我國(guó)農(nóng)業(yè)農(nóng)村部和國(guó)家市場(chǎng)監(jiān)督管理總局2019年發(fā)布的GB 31650-2019《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中獸藥最 大殘留*》中明確規(guī)定了伊維菌素、多拉菌素、阿維菌素、乙酰氨基阿維菌素在動(dòng)物靶組織中的殘留*。

本文闡述了如何將伊維菌素從樣品基質(zhì)中分離提取出來，并經(jīng)過凈化后，轉(zhuǎn)化成液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀可以檢測(cè)的形式。以提取、凈化為重點(diǎn)，依據(jù)國(guó)標(biāo)GB/T 22953-2008，為檢測(cè)人員和相關(guān)領(lǐng)域研究人員提供一定的參考。

檢測(cè)項(xiàng)目：伊維菌素、阿維菌素、多拉菌素、乙酰氨基阿維菌素

應(yīng)用范圍：河豚魚肌肉、鰻魚肌肉、烤鰻

高效液相色譜法

方法原理：河豚魚、鰻魚和烤鰻中殘留的伊維菌素、阿維菌素、多拉菌素和乙酰氨基阿維菌素殘留用乙腈提取后，正己烷脫脂，中性氧化鋁柱凈化。樣品溶液供液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀檢測(cè)，外標(biāo)峰面積法定量。

前處理儀器：

分析天平（感量0.1 mg和0.01 g）；組織搗碎機(jī)；勻漿機(jī)（8000 r/min）；離心機(jī)（4000 r/min）；超聲波水浴；液體混勻器；固相萃取裝置；氮吹儀。 

檢測(cè)儀器： HPLC-MS/MS+ESI源

試樣的制備與保存

取樣品約500 g用組織搗碎機(jī)搗碎，裝入潔凈容器作為試樣，密封，并標(biāo)明標(biāo)記，于零下18 ℃冰箱中保存。制樣操作過程中應(yīng)防止樣品受到污染或殘留物含量發(fā)生變化。

前處理方法

1.提取

準(zhǔn)確稱取2 g組織樣品（準(zhǔn)確至0.01 g）至50 mL離心管中，加入8 mL乙腈，勻漿機(jī)上8000 r/min均質(zhì)20 s，4000 r/min離心5 min，上清液轉(zhuǎn)移至50 mL離心管中；另取一50 mL離心管加入8 mL乙腈，洗滌勻漿刀頭10 s，洗滌液移入前一離心管中，用玻棒搗碎離心管中的沉淀，液體混勻器上振蕩30 s，4000 r/min離心5 min，上清液合并至50 mL離心管，離心管中的沉淀再加入6 mL乙腈，用玻棒搗碎離心管中的沉淀，液體混勻器上振蕩30 s，4000 r/min離心5 min，上清液合并至50 mL離心管中，乙腈定容至25.0 mL刻度，混勻備用。

2.凈化

向上述裝有樣品提取液的50 mL離心管中加入10 mL乙腈飽和的正己烷脫脂，渦旋振蕩1 min，4000 r/min離心5 min，棄去上層正己烷，重復(fù)此操作一次，下層乙腈溶液待用。

將中性氧化鋁凈化柱安置在固相萃取裝置上，準(zhǔn)確移取10.0 mL已脫脂的樣品提取液至中性氧化鋁凈化柱中，控制流速在1 mL /min～2 mL /min，用2 mL×2乙腈淋洗凈化柱，收集全部流出液，流出液轉(zhuǎn)移至吹氮管中，50 ℃下氮?dú)獯抵粮桑?/font>1.00 mL乙腈溶解殘?jiān)⒅贸暡ㄋ≈谐曊袷?/font>10 min，0.2 μm濾膜過濾，供液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定。

國(guó)標(biāo)解讀及注意事項(xiàng)

1.標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)用乙腈配成100 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，在零下18 ℃保存。

2.本方法通過乙腈提取，正己烷脫脂，中性氧化鋁柱凈化的方式進(jìn)行目標(biāo)化合物的提取凈化。

3.本方法采用洗滌均質(zhì)刀頭，三次提取的方式，提高目標(biāo)化合物的回收率。

4.氧化鋁柱凈化過程中除了活化溶液，其余溶液（上樣液和淋洗液）都要收集。為保證凈化效果，過柱時(shí)需要控制流速，使溶液一滴一滴地流下。可用商品化的中性氧化鋁固相萃取柱替代方法中手工填充的中性氧化鋁凈化柱。

5.由于該類化合物沒有對(duì)應(yīng)的同位素內(nèi)標(biāo)用于回收率的校正，所以本方法使用空白樣品提取液配制基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作液，進(jìn)行定量。

參考文獻(xiàn)

GB/T 22953-2008 河豚魚、鰻魚和烤鰻中伊維菌素、阿維菌素、多拉菌素和乙酰氨基阿維菌素殘留量的測(cè)定 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法

河豚魚、鰻魚中伊維菌素殘留量測(cè)定的前處理流程圖：